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本發(fā)明涉及一種提高CHO細(xì)胞重組蛋白表達(dá)水平的方法及其應(yīng)用，表達(dá)載體、表達(dá)系統(tǒng)及其制備方法，屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明中的方法應(yīng)用CHO細(xì)胞內(nèi)源miRNAs與3′?UTR轉(zhuǎn)錄區(qū)互補(bǔ)結(jié)合來對(duì)篩選標(biāo)記基因表達(dá)進(jìn)行負(fù)性調(diào)節(jié)，進(jìn)而提高目的基因的表達(dá)量。將miRNAs與3′?UTR轉(zhuǎn)錄區(qū)克隆到篩選標(biāo)記基因的下游，構(gòu)建真核表達(dá)載體；然后將目的基因克隆到真核表達(dá)載體獲得重組表達(dá)載體，然后將其轉(zhuǎn)染細(xì)胞，獲得CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)目的基因的高效表達(dá)。本發(fā)明的CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，可以顯著提高目的基因在CHO細(xì)胞中的表達(dá)水平，實(shí)現(xiàn)目的蛋白在CHO細(xì)胞的高產(chǎn)量穩(wěn)定表達(dá)。

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