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本發(fā)明公開了一種雙順反子表達(dá)載體、表達(dá)系統(tǒng)、制備方法及應(yīng)用，屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域。該表達(dá)載體包含核基質(zhì)結(jié)合區(qū)序列、內(nèi)核糖體進(jìn)入位點(diǎn)序列和篩選標(biāo)記，通過在啟動(dòng)子與IRES序列之間插入目的基因，可構(gòu)成目的基因?IRES序列?篩選標(biāo)記基因依次連接的雙順反子序列。表達(dá)載體的結(jié)構(gòu)為：MAR?啟動(dòng)子?目的基因?IRES序列?篩選標(biāo)記?PolyA?MAR。該載體利用一個(gè)啟動(dòng)子實(shí)現(xiàn)目的基因和篩選標(biāo)記的同時(shí)表達(dá)，可減少由于不同表達(dá)框存在導(dǎo)致的假陽(yáng)性細(xì)胞克隆，提高陽(yáng)性細(xì)胞克隆篩選率，并克服傳統(tǒng)載體目的基因與篩選標(biāo)記表達(dá)不均衡的問題；載體上包含MAR序列能克服轉(zhuǎn)基因沉默，實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因在宿主細(xì)胞中的高效、長(zhǎng)期表達(dá)。

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