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本發(fā)明涉及一種通過CRISPR/Cas9系統(tǒng)快速獲得大片段缺失的細(xì)胞系基因敲除方法，屬于基因工程和遺傳修飾領(lǐng)域。本發(fā)明改造pX458載體，使其帶有DsRed2和ECFP，然后針對目標(biāo)基因設(shè)計多個特異性的sgRNA位點(diǎn)，將其連接至改造載體中，轉(zhuǎn)染細(xì)胞系后利用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞群進(jìn)行分選，可以非?？焖佾@得基因組被編輯的單細(xì)胞，然后用PCR擴(kuò)增單細(xì)胞DNA序列，通過凝膠電泳即可以從中挑選出具有大片段缺失的單細(xì)胞。本發(fā)明通過將CRISPR/Cas9系統(tǒng)、流式細(xì)胞儀單細(xì)胞分選和表達(dá)載體上的熒光蛋白篩選三者結(jié)合起來，可以在短時間內(nèi)獲得具有大片段缺失的陽性單克隆，極大地提高細(xì)胞系基因敲除工作效率。

1、選定專利：顧問一對一服務(wù)，幫助買家選中所需專利，并確認(rèn)賣家專利可交易；

2、簽訂合同：買賣雙方與顧問協(xié)商交易細(xì)節(jié)，簽訂合同；

3、支付款項：買家依合同約定支付交易款項到運(yùn)營平臺；

4、提供材料：買賣雙方需要提供《專利代理委托書》、《轉(zhuǎn)讓協(xié)議》、《解聘書》等材料給辦理轉(zhuǎn)讓手續(xù)方；

5、辦理手續(xù)：辦理轉(zhuǎn)讓手續(xù)方提交材料至國家知識產(chǎn)權(quán)局辦理轉(zhuǎn)讓手續(xù)，國家知識產(chǎn)權(quán)局最快半個月左右下發(fā)專利轉(zhuǎn)讓《手續(xù)合格通知書》；

6、證書交接：買家確認(rèn)收到《專利證書》、專利轉(zhuǎn)讓《手續(xù)合格通知書》原件，確認(rèn)無誤。

7、交易完成：平臺把交易款項支付給賣家，至此專利轉(zhuǎn)讓業(yè)務(wù)完成。

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